Участници: Александър Куков, PhD

Наименование на посетената институция:
Interuniversitäre Department für Agrarbiotechnologie, IFA Tulln, Austria Department IFA-Tulln, Institute of Biotechnology in Animal Production.

Период на посещение: 06.05.2012 – 13.05.2012

Цел на посещението: проучване на методи за изследване на молекулни промени в половия апарат на женски животни след осеменяване.

Научната програма на визита включваше:
Посетената от мен лаборатория се занимава с протеомен анализ на белтъци от ендотелните клетки на яйцепроводите. Лабораторията е добре оборудвана и разполага със съвремена апаратура за изследване на протеини: SDS PAGE, IEF, 2D, скенери за визуализиртане на геловете и денситометрия. Анализите чрез мас спектрометрия се провеждат в друга лаборатория.
Изследвано е въздействието на сперматозоиди върху ендотелните клетки (изследвани са някои белтъци) на яйцепровода след осеменяване. За целта бяха проведени 2D електрофореза и протеинен анализ на фосфопротеини от ендотелни клетки на яйцепроводи при зайци по време на осеменяване. Изолират се фосфопротеини от клетъчни лизати. Белтъците се оцветяват с флуорохромните бои Cy 3 и Cy5, след това се провежда изоелектрично фокусиране на протеините, като първоначално стриповете (BioRad) се рехидратират за 12 часа, след което се стартира фокусирането. След IEF стриповете се инкубират в DTT за 20 мин, следва инкубиране на стриповете в йодацетамид за 20 мин. За провеждането на втората електрофореза се използват Precast Gels (BioRad), като стриповете се поставят на определеното място, при тази електрофореза белтъците се разделят по молекулно тегло. Готовите гелове се сканират, след сканирането геловете може допълнително да се подложат на сребърно оцветяване. При сребърното оцветяване се избягва използването на глутаралдехид, понеже някои от спотове се подлагат на последващ анализ чрез MALDI TOF.
Проведе се кратко обучение за работа с някои софтуери като MS-FIT, MS Taq, ExPASy и др., които се използват за анализ на данните получени след масспектрометричните изследвания.

Заключение: Планираната програма бе успешно изпълнена. По време на работата в лабораторията се запознах с основните подходи на работа при изоелектричното фокусиране на протеини, белязване на белтъците в пробите с флуорохроми, сканиране на гелове и др.